Lecitinastest-mål, princip, procedur och resultat

biologiska pedagogiska videor

Senast uppdaterad den 4 februari 2021 av Sagar Aryal

Målet med Lecitinastest

målet är att bestämma mikroorganismernas förmåga att producera enzymet lecitinas och att identifiera de bakterier som kan producera lecitinasenzym.

princip för Lecitinastest

Lecitinaser eller fosfolipaser är enzymer som frigörs av bakterier som har förmågan att förstöra djurvävnader och spela en roll i patogenecity. Lecitinas, som också kallas fosfolipas C, är ett sådant enzym som delar upp fosfolipidlecitinet. Fosfolipidkomplex är vanligtvis emulgerande medel som förekommer i vävnader, serum och äggula. Lecitin är en normal komponent i äggulan. Lecitinasaktivitet används för att karakterisera flera gram-positiva och gramnegativa bakterier. Bakteriella lecitinaser bryter ner detta lecitin till en olöslig diglycerider vilket resulterar i en ogenomskinlig halo som omger kolonin när den odlas på äggulaagarmediet.

äggula Agar är ett differentiellt och berikat medium som används vid isolering och presumtiv differentiering av olika arter baserat på deras lecitinas-och lipasproduktion och proteolytisk aktivitet. I äggulaagar kan lipoproteinkomponenten Lecitovitellin också delas av lecitinas i fosforylkolin och en olöslig diglycerid, vilket resulterar i bildandet av en fällning i mediet. Denna fällning uppträder som en vit Gloria som omger kolonin som producerar lecitinasenzym. Den skapade opalescensen beror på frisättningen av fritt fett.

Obs:

Bacillus cereus, aerob sporproducent är en stark lecitinaspositiv organism, kan identifieras med användning av mannitol-äggula-polymyxin (MYP) agarplattor. B. cereus är typiskt mannitol-negativ, producerar rosa-röda kolonier i MYP-agar med en fällningszon runt kolonierna, vilket indikerar lecitinas-positiv aktivitet. För identifiering av Clostridium perfringens och differentiering av den från andra Clostridiaarter används Äggulaagar. Det är ett berikat, icke-selektivt och differentiellt medium och används också i Nagler-testet för presumptiv identifiering av Clostridium perfringens. Den är förpackad i syrefritt, reducerat tillstånd för att förhindra bildandet av giftiga oxiderade biprodukter som kommer att skada de obligatoriska anaeroberna och hämma tillväxten av mer betungande arter. Ett positivt lecitinastest kännetecknas av utseendet av en vit, ogenomskinlig, diffus zon som sträcker sig in i mediet som omger kolonierna.

Media som används i Lecitinastest

äggula agar medium

pankreatisk Digest av kasein 15,0 g
Vitamin K 1 10,0 g
natriumklorid 5,0 g
Papaic Digest av sojamjöl 5.0 gm
jästextrakt 5.0gm
L-cystin 0,4 g
Hemin 5, 0 mg
äggula Emulsion 100, 0 ml
Agar 20,0 g

slutlig pH 7.0 +/- 0.3 vid 25 UCC.

förfarande för Lecitinastest

  1. ta en loopful av testorganismen och strimma den som en rak linje på plattan.
  2. inkubera anaerobt i en gas pak burk omedelbart efter strimmor och överföring till inkubatorn hålls vid 35-37O C för 24-48 timmar för anaerober och aerober inkubera plattan vid 35-37O C för 24-48 timmar.
  3. Undersök plattan för den opaliserande halo som omger inokulummen.

resultat tolkning av Lecitinas Test

Resultattolkning av Lecitinastest

positivt lecitinastest: utseende av en vit, ogenomskinlig, diffus zon som sträcker sig in i mediet som omger kolonierna.

negativt lecitinastest: frånvaro av en vit, ogenomskinlig zon som sträcker sig från kanten av kolonin.

begränsningar av Lecitinastest

  • underhåll av anaerobt tillstånd är obligatoriskt.
  • ett negativt lecitinastest bör jämföras med en oinokulerad kontrollplatta, eftersom lecitinas kan diffundera genom hela agarplattan och försvåra tolkningen.
  • perfringenstype a antitoxin är inte specifikt för C. perfringens; en positiv Nagler-reaktion kan också produceras av C. bifermentans, C. sordelli och C. baratti if heavy inoculum are used.

Quality Control of Lecithinase Test

Clostridium perfringens, ATCC13124: lecithinase positive

Clostridium sporogenes, ATCC11437: lecithinase negative

Lämna ett svar

Din e-postadress kommer inte publiceras.