testul Lecitinazei-obiective, principiu, procedură și rezultate

Biologie videoclipuri educaționale

actualizat ultima dată pe 4 februarie 2021 de Sagar Aryal

obiectivul testului Lecitinazei

obiectivul este de a determina capacitatea microorganismelor de a produce enzima lecitinază și de a identifica bacteriile care sunt capabile să producă enzima lecitinază.

principiul testului Lecitinazei

Lecitinazele sau fosfolipazele sunt enzime eliberate de bacterii care au capacitatea de a distruge țesuturile animale și joacă un rol în patogenitate. Lecitinaza, numită și fosfolipaza C, este o astfel de enzimă care împarte lecitina fosfolipidică. Complexele fosfolipidice sunt de obicei agenți de emulsionare care apar în țesuturi, ser și gălbenuș de ou. Lecitina este o componentă normală a gălbenușului de ou. Activitatea lecitinazei este utilizată pentru a caracteriza mai multe bacterii gram pozitive și gram negative. Lecitinazele bacteriene descompun această lecitină într-o digliceride insolubile, rezultând un halou opac, care înconjoară Colonia atunci când este cultivată pe mediul de agar de gălbenuș de ou.

agarul gălbenușului de ou este un mediu diferențiat și îmbogățit utilizat în izolarea și diferențierea prezumtivă a diferitelor specii pe baza producției lor de lecitinază și lipază și a activității proteolitice. În agar de gălbenuș de ou, componenta Lipoproteică Lecitovitellin poate fi, de asemenea, împărțită de lecitinază în fosforilcolină și o digliceridă insolubilă, ceea ce duce la formarea unui precipitat în mediu. Acest precipitat apare ca un halou alb, care înconjoară colonia care produce enzima lecitinază. Opalescența creată se datorează eliberării de grăsimi libere.

notă:

Bacillus cereus, producător de spori aerobi este un organism puternic pozitiv al lecitinazei, poate fi identificat folosind plăci de agar manitol-gălbenuș de ou-polimixină (MYP). B. cereus este de obicei manitol-negativ, produce colonii roz-roșii în agar MYP cu o zonă de precipitat în jurul coloniilor, indicând activitatea lecitinazei pozitive. Pentru identificarea Clostridium perfringens și diferențierea acestuia de alte specii de Clostridia, se utilizează Agar de gălbenuș de ou. Este un mediu îmbogățit, neselectiv și diferențial și este, de asemenea, utilizat în testul Nagler pentru identificarea prezumtivă a Clostridium perfringens. Este ambalat în stare redusă, fără oxigen, pentru a preveni formarea de subproduse toxice oxidate care vor deteriora anaerobii obligați și vor inhiba creșterea speciilor mai fastidioase. Un test pozitiv de lecitinază se caracterizează prin apariția unei zone albe, opace, difuze care se extinde în mediul înconjurător al coloniilor.

medii utilizate în testul Lecitinazei

gălbenuș de ou mediu agar

digestia pancreatică a cazeinei 15,0 gm
vitamina K 1 10,0 g
clorură de sodiu 5, 0 g
Digest Papaic de făină de soia 5.0 gm
extract de drojdie 5.0gm
L-cistină 0, 4 g
Hemin 5, 0 mg
emulsie de gălbenuș de ou 100,0 ml
Agar 20, 0 g

Ph Final 7.0 +/- 0.3 la 25 de grade Celsius.

procedura testului de Lecitinază

  1. luați o buclă plină de organism de testare și trageți-o ca o linie dreaptă pe farfurie.
  2. se incubează anaerob într-un borcan de gaz pak imediat după striații și se transferă în incubator menținut la 35-37O C timp de 24-48 ore pentru anaerobi și pentru aerobi se incubează placa la 35-37O C timp de 24-48 ore.
  3. examinați placa pentru halo-ul opalescent din jurul inoculilor.

interpretarea rezultatelor testului de Lecitinază

interpretarea rezultatelor testului Lecitinazei

testul lecitinazei pozitive: apariția unei zone albe, opace, difuze care se extinde în mediul înconjurător al coloniilor.

test negativ de lecitinază: absența unei zone albe, opace, care se extinde de la marginea coloniei.

limitările testului de Lecitinază

  • menținerea stării anaerobe este obligatorie.
  • un test negativ de lecitinază trebuie comparat cu o placă de control neinoculată, deoarece lecitinaza poate difuza pe întreaga placă de agar și poate îngreuna interpretarea.
  • antitoxina perfringenstype A nu este specifică pentru C. perfringens ; o reacție Nagler pozitivă poate fi produsă și de C. bifermentans , C. sordelli și C. baratti if heavy inoculum are used.

Quality Control of Lecithinase Test

Clostridium perfringens, ATCC13124: lecithinase positive

Clostridium sporogenes, ATCC11437: lecithinase negative

Lasă un răspuns

Adresa ta de email nu va fi publicată.