Atualizada por Último sobre 4 de fevereiro de 2021, por Sagar Aryal
> Objectivo de Lecithinase Teste
O objetivo é determinar a capacidade de microrganismos para produzir a enzima lecithinase e para identificar as bactérias que são capazes de produzir lecithinase enzima.
princípio do teste de Lecitinase
lecitinases ou fosfolipases são enzimas liberadas por bactérias que têm a capacidade de destruir tecidos animais e desempenhar um papel na patogenicidade. A lecitinase, também chamada de fosfolipase C, é uma enzima que divide a lecitina fosfolipídica. Os complexos fosfolipídicos são geralmente agentes emulsificantes que ocorrem nos tecidos, soro e gema de ovo. A lecitina é um componente normal da gema de ovo. A atividade da lecitinase é usada para caracterizar várias bactérias gram-positivas e gram-negativas. As lecitinases bacterianas decompõem essa lecitina em diglicerídeos insolúveis, resultando em um halo opaco, envolvendo a colônia quando cultivada no meio de ágar gema de ovo.
o Ágar gema de ovo é um meio diferencial e enriquecido utilizado no isolamento e na diferenciação presuntiva de diferentes espécies com base na produção de lecitinase e lipase e na atividade proteolítica. No Ágar gema de ovo, o componente lipoproteico Lecitovitelina também pode ser dividido pela lecitinase em fosforilcolina e um diglicerídeo insolúvel, o que resulta na formação de um precipitado no meio. Este precipitado ocorre como um halo branco, em torno da colônia que produz a enzima lecitinase. A opalescência criada é devido à liberação de gordura livre.
Nota:
Bacillus cereus, produtor de esporos aeróbicos é um forte organismo positivo à lecitinase, pode ser identificado usando placas de ágar manitol-gema de ovo-polimixina (MYP). B. cereus é tipicamente manitol-negativo, produz colônias rosa-vermelhas em ágar MYP com uma zona de precipitado ao redor das colônias, indicando atividade lecitinase-positiva. Para a identificação de Clostridium perfringens e diferenciá-lo de outras espécies de clostrídios, utiliza-se ágar gema de ovo. É um meio enriquecido, não seletivo e diferencial, e também é usado no teste de Nagler para a identificação presuntiva de Clostridium perfringens. É embalado no estado oxigênio-livre, reduzido a fim impedir a formação de subprodutos oxidados tóxicos que danificarão os anaeróbios obrigatórios e inibirão o crescimento de espécies mais fastidiosas. Um teste positivo de lecitinase é caracterizado pelo aparecimento de uma zona branca, opaca e difusa que se estende para o meio ao redor das colônias.
Mídia Utilizada no Teste Lecithinase
gema de Ovo agar médio
| Pâncreas Digerir a Caseína | 15.0 gm |
| a Vitamina K 1 | 10.0 gm |
| Cloreto de Sódio | 5.0 gm |
| Papaic resumo do farelo de Soja | 5.0 gm |
| o Extrato de Levedura | 5.0gm |
| L-Cistina | 0.4 gm |
| Hemina | 5,0 mg |
| Emulsão de Gema de Ovo | 100.0 ml |
| Agar | 20.0 gm |
pH Final 7.0 +/- 0.3 a 25ºC.
procedimento de teste de Lecitinase
- tome um loopful do organismo do teste e raia-o como uma linha reta na placa.
- incubar anaerobicamente em um frasco de pak de gás imediatamente após estrias e transferência para a incubadora mantida a 35-37o C por 24-48 horas para anaeróbios e para aeróbios incubar a placa a 35-37o C por 24-48 horas.
- Examine a placa para o halo opalescente em torno dos inoculos.
interpretação do resultado do teste de Lecitinase
Teste Positivo de lecitinase: aparência de uma zona branca, opaca e difusa que se estende até o meio ao redor das colônias.
teste de lecitinase negativa: ausência de uma zona branca e opaca que se estende da borda da colônia.
limitações do teste de Lecitinase
- a manutenção da condição anaeróbica é obrigatória.
- um teste negativo de lecitinase deve ser comparado a uma placa de controle não inoculada, pois a lecitinase pode se difundir por toda a placa de ágar e dificultar a interpretação.
- perfringenstype a antitoxin não é específico para C. perfringens; uma reação Nagler positiva também pode ser produzida por C. bifermentans , C. sordelli e C. baratti if heavy inoculum are used.
Quality Control of Lecithinase Test
Clostridium perfringens, ATCC13124: lecithinase positive
Clostridium sporogenes, ATCC11437: lecithinase negative