Prueba de Lecitinasa-Objetivos, Principio, Procedimiento y Resultados

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Última actualización el 4 de febrero de 2021 por Sagar Aryal

Objetivo de la Prueba de Lecitinasa

El objetivo es determinar la capacidad de los microorganismos para producir la enzima lecitinasa e identificar las bacterias capaces de producir la enzima lecitinasa.

Principio de la prueba de la Lecitinasa

Las lecitinasas o fosfolipasas son enzimas liberadas por bacterias que tienen la capacidad de destruir tejidos animales y desempeñan un papel en la patogenicidad. La lecitinasa, que también se llama fosfolipasa C, es una enzima que divide la lecitina fosfolípida. Los complejos fosfolípidos suelen ser agentes emulsionantes presentes en los tejidos, el suero y la yema de huevo. La lecitina es un componente normal de la yema de huevo. La actividad de la lecitinasa se utiliza para caracterizar varias bacterias gram positivas y gram negativas. Las lecitinasas bacterianas descomponen esta lecitina en diglicéridos insolubles, lo que resulta en un halo opaco, que rodea la colonia cuando se cultiva en el medio de agar de yema de huevo.

El Agar de yema de huevo es un medio diferencial y enriquecido utilizado en el aislamiento y presunta diferenciación de diferentes especies en función de su producción de lecitinasa y lipasa y actividad proteolítica. En el agar de yema de huevo, el componente lipoproteico Lecitovitelina también se puede dividir por lecitinasa en fosforilcolina y un diglicérido insoluble, lo que resulta en la formación de un precipitado en el medio. Este precipitado se presenta como un halo blanco, rodeando la colonia que produce la enzima lecitinasa. La opalescencia creada se debe a la liberación de grasa libre.

Nota:

Bacillus cereus, productor de esporas aeróbicas, es un organismo fuerte positivo a lecitinasa, que se puede identificar utilizando placas de agar de manitol-yema de huevo-polimixina (PAI). B. cereus es típicamente negativo en manitol, produce colonias de color rojo rosado en el agar del PAI con una zona de precipitado alrededor de las colonias, lo que indica actividad positiva a la lecitinasa. Para la identificación de Clostridium perfringens y su diferenciación de otras especies de Clostridium, se utiliza Agar de Yema de huevo. Es un medio enriquecido, no selectivo y diferencial, y también se utiliza en la Prueba de Nagler para la presunta identificación de Clostridium perfringens. Se envasa en estado reducido y libre de oxígeno para evitar la formación de subproductos oxidados tóxicos que dañarán los anaerobios obligados e inhibirán el crecimiento de especies más exigentes. Una prueba de lecitinasa positiva se caracteriza por la aparición de una zona blanca, opaca y difusa que se extiende hacia el medio que rodea a las colonias.

Medios de comunicación Utilizados en Lecithinase Prueba

la yema de Huevo con medio de agar

digerido Pancreático de Caseína 15.0 gm
la Vitamina K 1 10.0 gm
Cloruro de Sodio 5.0 gm
digerido papaico de Harina de Soja 5.0 gm
el Extracto de Levadura 5.0gm
L-Cistina 0.4 gm
la Hemina 5.0 mg
Emulsión de Yema de Huevo 100.0 ml
Agar 20.0 gm

pH Final 7.0 +/- 0.3 a 25ºC.

Procedimiento de la prueba de Lecitinasa

  1. Tome un bucle de organismo de prueba y vástrelo como una línea recta en el plato.
  2. Incubar anaeróbicamente en un frasco de gas pak inmediatamente después de rayar y transferir a la incubadora mantenida a 35-37o C durante 24-48 horas para anaerobios y para aerobios incubar la placa a 35-37o C durante 24-48 horas.
  3. Examine la placa en busca del halo opalescente que rodea los inóculos.

Interpretación de resultados de la Prueba de Lecitinasa

Interpretación de resultados de la prueba de lecitinasa

Prueba de lecitinasa positiva: aparición de una zona blanca, opaca y difusa que se extiende hasta el medio que rodea a las colonias.

Prueba de lecitinasa negativa: ausencia de una zona blanca opaca que se extienda desde el borde de la colonia.

Limitaciones de la prueba de Lecitinasa

  • El mantenimiento de la condición anaeróbica es obligatorio.
  • Una prueba de lecitinasa negativa debe compararse con una placa de control no inoculada, ya que la lecitinasa puede difundirse por toda la placa de agar y dificultar la interpretación.
  • la antitoxina perfringenstype A no es específica para C. perfringens ; una reacción positiva de Nagler también puede ser producida por C. bifermentans , C. sordelli y C. baratti if heavy inoculum are used.

Quality Control of Lecithinase Test

Clostridium perfringens, ATCC13124: lecithinase positive

Clostridium sporogenes, ATCC11437: lecithinase negative

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