Test Lecytynazowy-cele, zasada, procedura i wyniki

Biologia Filmy edukacyjne

Ostatnia aktualizacja: luty 4, 2021 przez Sagar Aryal

cel testu Lecytynazowego

celem jest określenie zdolności mikroorganizmów do wytwarzania enzymu lecytynazy oraz określenie bakterii zdolnych do wytwarzania enzymu lecytynazy.

zasada testu Lecytynazy

Lecytynazy lub fosfolipazy są enzymami uwalnianymi przez bakterie, które mają zdolność niszczenia tkanek zwierzęcych i odgrywają rolę w patogenezie. Lecytynaza, zwana również fosfolipazą C, jest takim enzymem, który rozdziela lecytynę fosfolipidową. Kompleksy fosfolipidowe są zwykle środkami emulgującymi występującymi w tkankach, surowicy i żółtku jaja. Lecytyna jest normalnym składnikiem żółtka jaja. Aktywność lecytynazy służy do scharakteryzowania kilku bakterii gram-dodatnich i gram-ujemnych. Lecytynazy bakteryjne rozkładają tę lecytynę na nierozpuszczalne diglicerydy, tworząc nieprzezroczystą otoczkę, otaczającą kolonię po wyhodowaniu na podłożu agarowym z żółtka jaja.

Agar z żółtka jaja jest zróżnicowanym i wzbogaconym podłożem stosowanym w izolacji i przypuszczalnym różnicowaniu różnych gatunków na podstawie ich produkcji lecytynazy i lipazy oraz aktywności proteolitycznej. W agarze z żółtka jaja, Składnik lipoproteinowy Lecythovitellin może być również podzielony przez lecytynazę na fosforylocholinę i nierozpuszczalny digliceryd, co powoduje tworzenie się osadu w pożywce. Osad ten występuje w postaci białego halo, otaczającego kolonię, która wytwarza enzym lecytynazowy. Opalescence powstaje dzięki uwalnianiu wolnego tłuszczu.

Uwaga:

Bacillus cereus, producent zarodników tlenowych jest silnym organizmem pozytywnym z lecytyną, można go zidentyfikować za pomocą płytek agarowych Mannitol-żółtko jaja-polimyksyna (MYP). B. cereus jest typowo ujemny dla mannitolu, wytwarza różowo-czerwone kolonie w agarze MYP ze strefą osadu wokół Kolonii, co wskazuje na aktywność lecytynazy dodatnią. Do identyfikacji Clostridium perfringens i odróżniania go od innych gatunków Clostridia stosuje się Agar z żółtka jaja. Jest wzbogaconym, nieselektywnym i zróżnicowanym medium i jest również stosowany w teście Naglera do przypuszczalnej identyfikacji Clostridium perfringens. Jest pakowany w beztlenowy, zredukowany stan, aby zapobiec tworzeniu się toksycznych utlenionych produktów ubocznych, które uszkodzą obligatoryjne beztlenowce i zahamują wzrost bardziej wybrednych gatunków. Dodatni test lecytynazy charakteryzuje się pojawieniem się białej, nieprzezroczystej, rozproszonej strefy, która rozciąga się na podłoże otaczające kolonie.

nośniki stosowane w teście Lecytynazy

środek agarowy z żółtka jaja

trawienie trzustki kazeiny 15,0 gm
witamina K 1 10,0 gm
chlorek sodu 5,0 gm
Papaic Digest śruty sojowej 5,0 gm
ekstrakt drożdżowy 5.0gm
L-cystyna 0,4 gm
Hemin 5, 0 mg
emulsja z żółtka jaja 100,0 ml
Agar 20,0 gm

końcowe pH 7.0 +/- 0.3 w temperaturze 25ºC.

procedura testu Lecytynazy

  1. weź zapętlony organizm testowy i smugi go jako linii prostej na płytce.
  2. inkubować beztlenowo w słoiku z gazem PAK natychmiast po smudze i przenieść do inkubatora utrzymywanego w temperaturze 35-37o C przez 24-48 godzin w przypadku beztlenowców, a w przypadku aerobów inkubować płytkę w temperaturze 35-37o C przez 24-48 godzin.
  3. zbadaj płytkę pod kątem opalizującego halo otaczającego inokulum.

interpretacja wyników testu Lecytynazy

interpretacja wyniku testu Lecytynazy

pozytywny wynik testu lecytynazy: pojawienie się białej, nieprzezroczystej, rozproszonej strefy, która rozciąga się na podłoże otaczające kolonie.

negatywny wynik testu lecytynazy: brak białej, nieprzezroczystej strefy rozciągającej się od krawędzi Kolonii.

ograniczenia testu Lecytynazy

  • utrzymanie stanu beztlenowego jest obowiązkowe.
  • ujemny test lecytynazy należy porównać z nieinokulowaną płytką kontrolną, ponieważ lecytynaza może rozproszyć się na całej płytce agarowej i utrudnić interpretację.
  • antytoksyna perfringenstype a nie jest specyficzna dla C. perfringens ; dodatnia reakcja Naglera może być również wywołana przez C. bifermentans, C. sordelli i C. baratti if heavy inoculum are used.

Quality Control of Lecithinase Test

Clostridium perfringens, ATCC13124: lecithinase positive

Clostridium sporogenes, ATCC11437: lecithinase negative

Dodaj komentarz

Twój adres e-mail nie zostanie opublikowany.