Lecithinase Test – Objectives, Principle, Procedure and Results

Biology Educational Videos

laatst bijgewerkt op 4 februari 2021 door Sagar Aryal

Objective of Lecithinase Test

het doel is het vermogen van micro-organismen om het enzym lecithinase te produceren te bepalen en de bacteriën te identificeren die in staat zijn om lecithinase enzym te produceren.

principe van de Lecithinasetest

Lecithinases of phospholipases zijn enzymen die door bacteriën worden vrijgegeven die de capaciteit hebben om dierlijke weefsels te vernietigen en een rol in pathogenecity spelen. Lecithinase, dat ook fosfolipase C wordt genoemd, is zo ‘ n enzym dat de fosfolipide lecithine splitst. Fosfolipide complexen zijn meestal emulgerende middelen die voorkomen in weefsels, serum en eigeel. Lecithine is een normaal bestanddeel van het eigeel. De activiteit van de Lecithinase wordt gebruikt om verscheidene grampositieve en gramnegatieve bacteriën te karakteriseren. Bacteriële lecithinasen breken dit lecithine af tot onoplosbare diglyceriden, wat resulteert in een ondoorzichtige halo, die de kolonie omringt wanneer ze op het eidooieragarmedium worden gekweekt.

Eigeelagar is een differentieel en verrijkt medium dat wordt gebruikt bij de isolatie en vermoedelijke differentiatie van verschillende soorten op basis van hun lecithinase-en lipaseproductie en proteolytische activiteit. In eidooieragar kan de lipoproteïnecomponent Lecithovitelline ook worden gesplitst door lecithinase in fosforylcholine en een onoplosbaar diglyceride, wat resulteert in de vorming van een neerslag in het medium. Dit precipitaat komt voor als een witte halo, rond de kolonie die lecithinase enzym produceert. De gecreëerde opalescentie is te wijten aan het vrijkomen van vrij vet.

opmerking:

Bacillus cereus, aërobe sporenproducent is een sterk lecithinasepositief organisme, kan worden geïdentificeerd met Mannitol-eigeel-polymyxine (MYP) agarplaten. B. cereus is typisch mannitol-negatief, produceren roze-rode kolonies in MYP agar met een zone van neerslag rond de kolonies, wat wijst op lecithinase-positieve activiteit. Voor de identificatie van Clostridium perfringens en het onderscheiden van andere Clostridia-soorten wordt Eigeelagar gebruikt. Het is een verrijkt, niet-selectief en differentieel medium en wordt ook gebruikt in de Nagler Test voor de vermoedelijke identificatie van Clostridium perfringens. Het wordt verpakt in zuurstofvrije, verminderde staat om de vorming van giftige geoxideerde bijproducten te voorkomen die de obligate anaëroben zullen beschadigen en de groei van meer veeleisende soorten zullen remmen. Een positieve lecithinasetest wordt gekenmerkt door het verschijnen van een witte, ondoorzichtige, diffuse zone die zich uitstrekt in het medium rond de kolonies.

Media Gebruikt in Lecithinase Test

eigeel agar medium

Pancreas Verteren van Caseïne 15.0 gm
Vitamine K) 1 10.0 gm
Natriumchloride 5.0 gm
Papaic Verteren van sojameel 5.0 gm
Gist-Extract 5.0gm
L-Cystine 0.4 gm
Hemin 5,0 mg
Eigeel Emulsie 100.0 ml
Agar 20.0 gm

Uiteindelijke pH-waarde 7.0 +/- 0.3 bij 25ºC.

Procedure van de Lecithinasetest

  1. neem een loopvol testorganisme en strek het als een rechte lijn op de plaat.Incubeer anaeroob in een gas pak pot onmiddellijk na het streaken en breng over in de incubator die gedurende 24-48 uur bij 35-37o C wordt gehouden voor anaeroben en voor aeroben incubeer de plaat gedurende 24-48 uur bij 35-37o C.
  2. onderzoek de plaat op de opaalachtige halo rond het entmateriaal.

resultaat interpretatie van Lecithinasetest

resultaat interpretatie van Lecithinasetest

positieve lecithinasetest: verschijning van een witte, ondoorzichtige, diffuse zone die zich uitstrekt tot in het medium rond de kolonies.

negatieve lecithinasetest: geen witte, ondoorzichtige zone vanaf de rand van de kolonie.

beperkingen van Lecithinasetest

  • onderhoud van anaërobe toestand is verplicht.
  • een negatieve lecithinasetest moet worden vergeleken met een niet-geïnoculeerde controleplaat, aangezien lecithinase over de gehele agarplaat kan diffunderen en interpretatie moeilijk kan maken.Perfringenstype a antitoxine is niet specifiek voor C. perfringens ; een positieve Naglerreactie kan ook worden veroorzaakt door C. bifermentans, C. sordelli en C. baratti if heavy inoculum are used.

Quality Control of Lecithinase Test

Clostridium perfringens, ATCC13124: lecithinase positive

Clostridium sporogenes, ATCC11437: lecithinase negative

Geef een antwoord

Het e-mailadres wordt niet gepubliceerd.