Lecithinase Test – Mål, Prinsipp, Prosedyre Og Resultater

Biologi Pedagogiske Videoer

Sist Oppdatert 4. februar 2021 Av Sagar Aryal

Mål For Lecitinase Test

målet er å bestemme mikroorganismernes evne til å produsere enzymet lecitinase og å identifisere bakteriene som er i stand til å produsere lecitinaseenzym.

Prinsipp For Lecitinase Test

Lecitinaser eller fosfolipaser er enzymer frigjort av bakterier som har evne til å ødelegge animalsk vev og spille en rolle i patogenitet. Lecitinase, som også kalles fosfolipase C, er et slikt enzym som deler fosfolipid lecitin. Fosfolipidkomplekser er vanligvis emulgerende midler som forekommer i vev, serum og eggeplomme. Lecithin er en vanlig del av eggeplommen. Lecitinaseaktivitet brukes til å karakterisere flere gram positive og gram negative bakterier. Bakterielle lecitinaser bryter ned dette lecitinet til et uoppløselig diglyserider som resulterer i en ugjennomsiktig halo, som omgir kolonien når den vokser på eggeplommens agarmedium.

Eggeplomme Agar er et differensielt og beriket medium som brukes i isolering og presumptiv differensiering av forskjellige arter basert på deres lecitinase og lipase produksjon og proteolytisk aktivitet. I eggeplomme agar Kan lipoproteinkomponenten Lecithovitellin også deles av lecitinase i fosforylkolin og et uoppløselig diglyserid, noe som resulterer i dannelsen av et bunnfall i mediet. Dette bunnfallet skjer som en hvit halo, som omgir kolonien som produserer lecitinase enzym. Opalescensen opprettet skyldes frigjøring av fritt fett.

Merk:

Bacillus cereus, aerobic spore produsent er en sterk lecitinase positiv organisme, kan identifiseres Ved Hjelp Av Mannitol-eggeplomme-polymyxin (MYP) agar plater. B. cereus er typisk mannitol-negativ, produserer rosa-røde kolonier I MYP agar med en sone av bunnfall rundt koloniene, noe som indikerer lecitinase-positiv aktivitet. For å identifisere clostridium perfringens og skille den fra andre Clostridia-arter, Brukes Eggeplomme Agar. Det er et beriket, ikke-selektivt og differensialt medium, og brukes også I Nagler-Testen for presumptiv identifisering av Clostridium perfringens. Den er pakket i oksygenfri, redusert tilstand for å forhindre dannelse av giftige oksiderte biprodukter som vil skade de obligatoriske anaerobene og hemme veksten av mer kjedelige arter. En positiv lecitinase test er preget av utseendet av en hvit, ugjennomsiktig, diffus sone som strekker seg inn i mediet rundt koloniene.

Medier Som Brukes I Lecitinase Test

eggeplomme agar medium

Pankreatisk Fordøyelse Av Kasein 15,0 gm
Vitamin K 1 10,0 gm
Natriumklorid 5,0 g
Papaic Fordøye Av Soyabønne Måltid 5.0 gm
Gjærekstrakt 5.0gm
L-Cystin 0,4 gm
Hemin 5,0 mg
Eggeplomme Emulsjon 100,0 ml
Agar 20,0 gm

Endelig pH 7.0 +/- 0.3 ved 25º

Prosedyre Av Lecitinase Test

  1. Ta en loopful av testorganismen og strekk den som en rett linje på platen.
  2. Inkuber anaerobt i en gasspak-krukke umiddelbart etter streaking og overføring til inkubatoren opprettholdt ved 35 – 37o C i 24-48 timer for anaerober og for aerobes inkuber platen ved 35 – 37o C i 24-48 timer.
  3. Undersøk platen for den opaliserende haloen som omgir inokulumene.

Resultat Tolkning Av Lecitinase Test

Resultat Tolkning Av Lecitinase Test

Positiv lecitinase test: utseende av en hvit, ugjennomsiktig, diffus sone som strekker seg inn i mediet rundt koloniene.

Negativ lecitinase test: fravær av en hvit, ugjennomsiktig sone som strekker seg fra kanten av kolonien.

Begrensninger Av Lecitinase Test

  • Vedlikehold av anaerob tilstand er obligatorisk.
  • en negativ lecitinase test bør sammenlignes med en ikke-inokulert kontrollplate, da lecitinase kan diffundere gjennom hele agarplaten og gjøre tolkning vanskelig.
  • perfringenstype a antitoksin er ikke spesifikk For c. perfringens; en positiv Nagler-reaksjon kan også produseres Av c. bifermentans, C. sordelli og C. baratti if heavy inoculum are used.

Quality Control of Lecithinase Test

Clostridium perfringens, ATCC13124: lecithinase positive

Clostridium sporogenes, ATCC11437: lecithinase negative

Legg igjen en kommentar

Din e-postadresse vil ikke bli publisert.