レシチナーゼ試験-目的、原理、手順および結果

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Last Updated on February4,2021by Sagar Aryal

レシチナーゼ試験の目的

目的は、酵素レシチナーゼを産生する微生物の能力を決定し、レシチナーゼ酵素を産生することができる細菌を同定することである。

レシチナーゼ試験の原理

レシチナーゼまたはホスホリパーゼは、動物組織を破壊し、病原性において役割を果たす能力を有する細菌によって放出される酵素である。 ホスホリパーゼCとも呼ばれるレシチナーゼは、リン脂質レシチンを分割する酵素である。 リン脂質複合体は、通常、組織、血清および卵黄中に生じる乳化剤である。 レシチンは卵黄の正常な成分です。 レシチナーゼの活動が複数のグラム陽性およびグラム陰性の細菌を特徴付けるのに使用されています。 細菌のレシチナーゼは卵黄の寒天媒体で育ったときコロニーを囲む不透明なハローに終って不溶解性のジグリセリドにこのレシチンを破壊します。

卵黄寒天は、レシチナーゼおよびリパーゼの産生およびタンパク質分解活性に基づいて、異なる種の単離および推定分化に使用される差動および富 卵黄寒天では、リポタンパク質成分レシトビテリンはレシチナーゼによってホスホリルコリンと不溶性のジグリセリドに分割することもでき、培地中に沈殿物が形成される。 この沈殿物は、レシチナーゼ酵素を産生するコロニーを取り囲む白いハローとして生じる。 作成される乳白色は自由な脂肪の解放が原因です。

注:

セレウス菌、好気性胞子生産者は強いレシチナーゼ陽性生物であり、マンニトール-卵黄-ポリミキシン(MYP)寒天プレートを用いて同定することができる。 B.cereusは典型的にはマンニトール陰性であり、コロニーの周りに沈殿物のゾーンを有するMYP寒天中でピンク-赤のコロニーを生成し、レシチナーゼ陽性活性を示す。 Clostridium perfringensの同定と他のClostridia種との区別のために、卵黄寒天が使用される。 それは富ませた、非選択的な、および差動媒体で、Clostridiumのperfringensの推定同一証明のためにNaglerテストでも使用されます。 偏性嫌気性菌を損傷し、より気難しい種の成長を阻害する有毒な酸化副生成物の形成を防止するために、無酸素、還元状態で包装されています。 肯定的なレシチナーゼテストはコロニーを囲む媒体に伸びる白く、不透明な、拡散地帯の出現によって特徴付けられます。

レシチナーゼ試験で使用される培地

卵黄寒天培地

カゼインの膵消化液 15.0gm
ビタミンK1 10.0gm
塩化ナトリウム 5.0
大豆ミールのパパイヤダイジェスト 5.0gm
酵母エキス 5.0gm
L-シスチン 0.4gm
ヘミン 5.0mg
卵黄乳剤 100.0ml
寒天 20.0

最終的なpH7.0 +/- 0.3 25℃で。

レシチナーゼ試験の手順

  1. 試験生物のループを取り、プレート上の直線としてそれを連勝。
  2. ストリーキング直後のガスパックジャー中で嫌気的にインキュベートし、嫌気性菌の場合は35-37o Cに維持されたインキュベーターに24-48時間、嫌気性菌の場合は35-37o Cに24-48時間インキュベートする。

レシチナーゼ試験の結果解釈

レシチナーゼテストの結果の解釈

陽性レシチナーゼテスト:コロニーを囲む培地に広がる白色、不透明、拡散ゾーンの外観。

負のレシチナーゼ試験:コロニーの端から延びる白色の不透明なゾーンが存在しない。

レシチナーゼ試験の限界

  • 嫌気性状態の維持は義務的である。
  • レシチナーゼは寒天プレート全体に拡散し、解釈が困難になる可能性があるため、陰性レシチナーゼ試験は非接種対照プレートと比較する必要があります。
  • perfringenstype a抗毒素はC.perfringensに特異的ではなく、陽性のNagler反応はC.bifermentans、C.sordelli、およびCによっても生成することができる。 baratti if heavy inoculum are used.

Quality Control of Lecithinase Test

Clostridium perfringens, ATCC13124: lecithinase positive

Clostridium sporogenes, ATCC11437: lecithinase negative

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