Lecitináz teszt-célkitűzések, elv,eljárás és eredmények

Biológia oktatási videók

Utoljára frissítve: február 4, 2021 Sagar Aryal

a Lecitináz teszt célja

a cél a mikroorganizmusok lecitináz enzim előállítására való képességének meghatározása, valamint a lecitináz enzim előállítására képes baktériumok azonosítása.

a Lecitináz teszt elve

a lecitinázok vagy foszfolipázok olyan baktériumok által felszabaduló enzimek, amelyek képesek elpusztítani az állati szöveteket és szerepet játszanak a patogenitásban. A lecitináz, amelyet foszfolipáz C-nek is neveznek, olyan enzim, amely felosztja a foszfolipid lecitint. A foszfolipid komplexek általában emulgeáló szerek, amelyek a szövetekben, a szérumban és a tojássárgájában fordulnak elő. A lecitin a tojássárgája normális összetevője. A lecitináz aktivitást számos gram-pozitív és gram-negatív baktérium jellemzésére használják. A bakteriális lecitinázok ezt a lecitint oldhatatlan digliceridekké bontják, ami átlátszatlan glóriát eredményez, amely körülveszi a kolóniát, amikor a tojássárgája agar közegben termesztik.

a tojássárgája agar differenciált és dúsított táptalaj, amelyet különböző fajok izolálására és feltételezett differenciálására használnak lecitináz és lipáz termelésük és proteolitikus aktivitásuk alapján. A tojássárgája agarban a lecitovitellin lipoprotein komponenst lecitinázzal is fel lehet osztani foszforilkolinra és oldhatatlan digliceridre, ami csapadék képződését eredményezi a közegben. Ez a csapadék fehér halóként fordul elő, körülvéve a lecitináz enzimet termelő telepet. A létrehozott opaleszcencia a szabad zsír felszabadulásának köszönhető.

Megjegyzés:

a Bacillus cereus, az aerob spóratermelő erős lecitináz-pozitív szervezet, mannit-tojássárgája-polimixin (MYP) agar lemezek segítségével azonosítható. A B. cereus jellemzően mannit-negatív, rózsaszín-vörös kolóniákat termel a MYP agar-ban, a telepek körüli csapadékzónával, jelezve a lecitináz-pozitív aktivitást. A Clostridium perfringens azonosítására és más Clostridia fajoktól való megkülönböztetésére tojássárgája agart használnak. Ez egy dúsított, nem szelektív és differenciális közeg, és a Nagler-tesztben is használják a Clostridium perfringens feltételezett azonosítására. Oxigénmentes, csökkentett állapotban van csomagolva, hogy megakadályozza a mérgező oxidált melléktermékek képződését, amelyek károsítják a kötelező anaerobokat és gátolják az igényesebb fajok növekedését. A pozitív lecitináz tesztet egy fehér, átlátszatlan, diffúz zóna megjelenése jellemzi, amely a telepeket körülvevő közegbe nyúlik.

a Lecitináz tesztben használt közegek

tojássárgája agar közepes

pancreas Digest kazein 15,0 gm
K-Vitamin 1 10,0 gm
nátrium-klorid 5, 0 gm
szójaliszt Papaic emésztése 5,0 gm
élesztőkivonat 5.0gm
L-cisztin 0,4 gm
Hemin 5, 0 mg
tojássárgája emulzió 100,0 ml
Agar 20, 0 gm

végső pH 7.0 +/- 0.3 25 PERCC.

Lecitináz teszt eljárás

  1. Vegyünk egy loopful teszt organizmus és csík, mint egy egyenes vonal a tányéron.
  2. inkubáljuk anaerob módon egy gázpak-edényben közvetlenül a csíkozás után, és helyezzük át az inkubátorba, amelyet 35-37O C-on tartunk 24-48 órán át anaerobok és aerobok esetén inkubáljuk a lemezt 35-37O C-on 24-48 órán keresztül.
  3. vizsgálja meg a lemezt az oltóanyagokat körülvevő opálos Glória szempontjából.

a Lecitináz teszt Eredményértelmezése

eredmény a Lecitináz teszt értelmezése

pozitív lecitináz teszt: fehér, átlátszatlan, diffúz zóna megjelenése, amely a telepeket körülvevő közegbe nyúlik.

negatív lecitináz teszt: a kolónia szélétől nyúló fehér, átlátszatlan zóna hiánya.

a Lecitináz teszt korlátai

  • az anaerob állapot fenntartása kötelező.
  • a negatív lecitináz tesztet egy be nem oltott kontrolllemezhez kell hasonlítani, mivel a lecitináz diffundálhat az egész agarlemezen, és megnehezítheti az értelmezést.
  • perfringenstype a antitoxin nem specifikus A C. perfringensre; pozitív Nagler-reakciót a C. bifermentans , a C. sordelli és a C. baratti if heavy inoculum are used.

Quality Control of Lecithinase Test

Clostridium perfringens, ATCC13124: lecithinase positive

Clostridium sporogenes, ATCC11437: lecithinase negative

Vélemény, hozzászólás?

Az e-mail-címet nem tesszük közzé.