Test de Lécithinase – Objectifs, Principe, Procédure et Résultats

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Dernière Mise à jour le 4 février 2021 par Sagar Aryal

Objectif du Test de Lécithinase

L’objectif est de déterminer la capacité des microorganismes à produire l’enzyme lécithinase et d’identifier les bactéries capables de produire l’enzyme lécithinase.

Principe du test de la lécithinase

Les lécithinases ou phospholipases sont des enzymes libérées par des bactéries qui ont la capacité de détruire les tissus animaux et jouent un rôle dans la pathogénicité. La lécithinase, également appelée phospholipase C, est une enzyme qui divise la lécithine phospholipidique. Les complexes phospholipidiques sont généralement des agents émulsifiants présents dans les tissus, le sérum et le jaune d’oeuf. La lécithine est un composant normal du jaune d’oeuf. L’activité de la lécithinase est utilisée pour caractériser plusieurs bactéries gram positives et gram négatives. Les lécithinases bactériennes décomposent cette lécithine en diglycérides insolubles, ce qui donne un halo opaque entourant la colonie lorsqu’elle est cultivée sur le milieu gélosé au jaune d’œuf.

La gélose au jaune d’oeuf est un milieu différentiel et enrichi utilisé dans l’isolement et la différenciation présumée de différentes espèces en fonction de leur production de lécithinase et de lipase et de leur activité protéolytique. Dans la gélose au jaune d’oeuf, la lécithovitelline, composante lipoprotéique, peut également être divisée par la lécithinase en phosphorylcholine et en un diglycéride insoluble, ce qui entraîne la formation d’un précipité dans le milieu. Ce précipité se présente sous la forme d’un halo blanc entourant la colonie qui produit l’enzyme lécithinase. L’opalescence créée est due à la libération de graisse libre.

Remarque:

Bacillus cereus, producteur de spores aérobies, est un organisme fort positif à la lécithinase, peut être identifié à l’aide de plaques de gélose Mannitol-jaune d’oeuf-polymyxine (MYP). B. cereus est généralement négatif au mannitol, produit des colonies rose-rouge dans la gélose MYP avec une zone de précipité autour des colonies, indiquant une activité positive à la lécithinase. Pour identifier Clostridium perfringens et le différencier des autres espèces de Clostridia, on utilise de la Gélose au jaune d’oeuf. C’est un milieu enrichi, non sélectif et différentiel, et il est également utilisé dans le test de Nagler pour l’identification présumée de Clostridium perfringens. Il est emballé dans un état réduit sans oxygène afin d’empêcher la formation de sous-produits oxydés toxiques qui endommageront les anaérobies obligatoires et inhiberont la croissance d’espèces plus exigeantes. Un test de lécithinase positif se caractérise par l’apparition d’une zone diffuse blanche, opaque, qui s’étend dans le milieu entourant les colonies.

Milieux utilisés dans le test de lécithinase

Gélose au jaune d’oeuf moyen

Digest pancréatique de Caséine 15,0 g
Vitamine K 1 10,0 g
Chlorure de sodium 5,0 g
Digeste papaïque de Tourteau de soja 5,0 g
Extrait de levure 5.0gm
L-Cystine 0,4 g
Hémine 5,0 mg
Émulsion de jaune d’oeuf 100,0ml
Gélose 20,0 g

Ph final 7.0 +/- 0.3 à 25ºC.

Procédure de test de la lécithinase

  1. Prenez une boucle d’organisme de test et tracez-la en ligne droite sur la plaque.
  2. Incuber anaérobiquement dans un pot de pak à gaz immédiatement après la strie et transférer dans l’incubateur maintenu à 35-37o C pendant 24-48 heures pour les anaérobies et pour les aérobies incuber la plaque à 35-37o C pendant 24-48 heures.
  3. Examinez la plaque à la recherche du halo opalescent entourant les inoculums.

Interprétation des résultats du test de lécithinase

 Interprétation des résultats du Test de lécithinase

Test de lécithinase positif : apparition d’une zone diffuse blanche, opaque, qui s’étend dans le milieu entourant les colonies.

Test de lécithinase négatif : absence de zone blanche et opaque s’étendant à partir du bord de la colonie.

Limites du test de lécithinase

  • Le maintien de l’état anaérobie est obligatoire.
  • Un test de lécithinase négatif doit être comparé à une plaque témoin non inoculée, car la lécithinase peut diffuser dans toute la plaque de gélose et rendre l’interprétation difficile.
  • l’antitoxine perfringenstype A n’est pas spécifique de C. perfringens ; une réaction de Nagler positive peut également être produite par C. bifermentans, C. sordelli et C. baratti if heavy inoculum are used.

Quality Control of Lecithinase Test

Clostridium perfringens, ATCC13124: lecithinase positive

Clostridium sporogenes, ATCC11437: lecithinase negative

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