Lecithinase-Test- Ziele, Prinzip, Verfahren und Ergebnisse

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Zuletzt aktualisiert am 4. Februar 2021 von Sagar Aryal

Ziel des Lecithinase-Tests

Ziel ist es, die Fähigkeit von Mikroorganismen zur Produktion des Enzyms Lecithinase zu bestimmen und die Bakterien zu identifizieren, die zur Produktion des Enzyms Lecithinase in der Lage sind.

Prinzip des Lecithinase-Tests

Lecithinasen oder Phospholipasen sind Enzyme, die von Bakterien freigesetzt werden, die tierisches Gewebe zerstören können und eine Rolle bei der Pathogenität spielen. Lecithinase, die auch Phospholipase C genannt wird, ist ein solches Enzym, das das Phospholipidlecithin spaltet. Phospholipidkomplexe sind üblicherweise Emulgatoren, die in Geweben, Serum und Eigelb vorkommen. Lecithin ist ein normaler Bestandteil des Eigelbs. Lecithinase-Aktivität wird verwendet, um mehrere grampositive und gramnegative Bakterien zu charakterisieren. Bakterielle Lecithinasen bauen dieses Lecithin zu unlöslichen Diglyceriden ab, was zu einem undurchsichtigen Halo führt, der die Kolonie umgibt, wenn er auf dem Eigelb-Agarmedium gezüchtet wird.

Eigelb-Agar ist ein differentielles und angereichertes Medium, das zur Isolierung und mutmaßlichen Differenzierung verschiedener Arten auf der Grundlage ihrer Lecithinase- und Lipaseproduktion und proteolytischen Aktivität verwendet wird. In Eigelb-Agar kann die Lipoproteinkomponente Lecithovitellin auch durch Lecithinase in Phosphorylcholin und ein unlösliches Diglycerid gespalten werden, was zur Bildung eines Niederschlags im Medium führt. Dieser Niederschlag tritt als weißer Halo auf, der die Kolonie umgibt, die das Lecithinase-Enzym produziert. Die erzeugte Opaleszenz beruht auf der Freisetzung von freiem Fett.

Hinweis:

Bacillus cereus, ein Sporenproduzent, ist ein stark Lecithinase-positiver Organismus, der mit Mannitol-Egg yolk-Polymyxin (MYP) -Agarplatten identifiziert werden kann. B. cereus ist typischerweise mannit-negativ, produzieren rosa-rote Kolonien in MYP-Agar mit einer Zone von Niederschlag um die Kolonien, was auf Lecithinase-positive Aktivität hinweist. Zur Identifizierung von Clostridium perfringens und zur Unterscheidung von anderen Clostridienarten wird Eigelbagar verwendet. Es ist ein angereichertes, nicht selektives und differentielles Medium und wird auch im Nagler-Test zur mutmaßlichen Identifizierung von Clostridium perfringens verwendet. Es ist in sauerstofffreiem, reduziertem Zustand verpackt, um die Bildung toxischer oxidierter Nebenprodukte zu verhindern, die die obligaten Anaerobier schädigen und das Wachstum anspruchsvollerer Arten hemmen. Ein positiver Lecithinase-Test ist durch das Auftreten einer weißen, opaken, diffusen Zone gekennzeichnet, die sich in das die Kolonien umgebende Medium erstreckt.

Im Lecithinase-Test verwendete Medien

Eigelb Agar medium

Pankreasverdauung von Casein 15,0 g
Vitamin K 1 10,0 g
Natriumchlorid 5,0 g
Papaic Verdauen von Sojamehl 5,0 g
Hefeextrakt 5.0gm
L-Cystin 0,4 g
Hemin 5,0 mg
Eigelb Emulsion 100,0 ml
Agar 20,0 g

Endgültiger pH-Wert 7.0 +/- 0.3 bei 25ºC.

Verfahren des Lecithinase-Tests

  1. Nehmen Sie eine Schleife Reagenzglas und streifen Sie es als gerade Linie auf den Teller.
  2. Anaerob in einem Gas-Pak-Gefäß unmittelbar nach dem Streifen inkubieren und in den Inkubator überführen, der bei 35-37o C für 24-48 Stunden für Anaerobier und für Aerobier gehalten wird die Platte bei 35-37o C für 24-48 Stunden inkubieren.
  3. Untersuchen Sie die Platte auf den opalisierenden Halo, der die Inokulum umgibt.

Ergebnisinterpretation des Lecithinase-Tests

 Ergebnisinterpretation des Lecithinase-Tests

Positiver Lecithinase-Test: Auftreten einer weißen, opaken, diffusen Zone, die sich in das die Kolonien umgebende Medium erstreckt.

Negativer Lecithinase-Test: Fehlen einer weißen, opaken Zone, die sich vom Rand der Kolonie erstreckt.

Einschränkungen des Lecithinase-Tests

  • Die Aufrechterhaltung des anaeroben Zustands ist obligatorisch.
  • Ein negativer Lecithinase-Test sollte mit einer nicht geimpften Kontrollplatte verglichen werden, da Lecithinase über die gesamte Agarplatte diffundieren und die Interpretation erschweren kann.
  • perfringentyp A Antitoxin ist nicht spezifisch für C. perfringens ; eine positive Nagler-Reaktion kann auch von C. bifermentans , C. sordelli und C. baratti if heavy inoculum are used.

Quality Control of Lecithinase Test

Clostridium perfringens, ATCC13124: lecithinase positive

Clostridium sporogenes, ATCC11437: lecithinase negative

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