Lecithinase Test-mål, princip, Procedure og resultater

Biologi pædagogiske videoer

sidst opdateret den 4. februar 2021 af Sagar Aryal

mål for Lecithinase Test

målet er at bestemme mikroorganismernes evne til at producere lecithinasen og at identificere de bakterier, der er i stand til at producere lecithinase.

princippet om Lecithinase Test

lecithinaser eller phospholipaser er bakterier, der har evnen til at ødelægge dyrevæv og spille en rolle i patogenebyen. Lecithinase, som også kaldes phospholipase C, er et sådant ferment, der opdeler phospholipid lecithin. Fosfolipidkomplekser er normalt emulgeringsmidler, der forekommer i væv, serum og æggeblomme. Lecithin er en normal bestanddel af æggeblommen. Lecithinaseaktivitet bruges til at karakterisere flere gram-positive og gram-negative bakterier. Bakterielle lecithinaser nedbryder denne lecithin til uopløselige diglycerider, hvilket resulterer i en uigennemsigtig halo, der omgiver kolonien, når den dyrkes på æggeblommeagarmediet.

Æggeblommeagar er et differentieret og beriget medium, der anvendes til isolering og formodet differentiering af forskellige arter baseret på deres lecithinase-og lipaseproduktion og proteolytiske aktivitet. I æggeblommeagar kan lipoproteinkomponenten Lecithovitellin også opdeles med lecithinase i phosphorylcholin og et uopløseligt diglycerid, hvilket resulterer i dannelsen af et bundfald i mediet. Dette bundfald forekommer som en hvid glorie, der omgiver kolonien, der producerer lecithinase. Den skabte opalescens skyldes frigivelsen af frit fedt.

Bemærk:

Bacillus cereus, aerob sporeproducent er en stærk lecithinase-positiv organisme, kan identificeres ved hjælp af Mannitol-æggeblomme-polymyksin (MYP) agarplader. B. cereus er typisk mannitol-negativ, producerer lyserøde-røde kolonier i MYP-agar med et bundfaldsområde omkring kolonierne, hvilket indikerer lecithinase-positiv aktivitet. Til identifikation af Clostridium perfringens og differentiering af det fra andre Clostridia-arter anvendes Æggeblommeagar. Det er et beriget, ikke-selektivt og differentieret medium og bruges også i Nagler-testen til formodet identifikation af Clostridium perfringens. Det er pakket i iltfri, reduceret tilstand for at forhindre dannelsen af giftige iltede biprodukter, der vil skade de obligatoriske anaerober og hæmme væksten af mere kræsne arter. En positiv lecithinase test er karakteriseret ved udseendet af et hvidt, uigennemsigtigt diffust område, der strækker sig ind i mediet omkring kolonierne.

medier anvendt i Lecithinase Test

æggeblomme agar medium

pankreatisk fordøjelse af kasein 15,0 gm
K-Vitamin 1 10, 0 gm
natriumchlorid 5, 0 g
Papaisk fordøjelse af sojabønnemel 5.0 gm
gærekstrakt 5.0gm
L-cystin 0, 4 gm
Hemin 5, 0 mg
æggeblomme Emulsion 100, 0 ml
Agar 20, 0 gm

endelig pH 7.0 +/- 0.3 ved 25 kr.

Procedure for Lecithinase Test

  1. tag en loopful af testorganisme og stræk den som en lige linje på pladen.
  2. inkuber anaerobt i en gas pak-krukke umiddelbart efter striber og overfør til inkubatoren opretholdt ved 35-37O C i 24-48 timer for anaerober og for aerober inkuberer pladen ved 35-37O C i 24-48 timer.
  3. Undersøg pladen for den opaliserende halo, der omgiver inokulumerne.

resultat fortolkning af Lecithinase Test

resultat fortolkning af Lecithinase Test

positiv lecithinase test: udseende af et hvidt, uigennemsigtigt, diffust område, der strækker sig ind i mediet omkring kolonierne.

negativ lecithinase-test: fravær af et hvidt, uigennemsigtigt område, der strækker sig fra koloniens kant.

begrænsninger af Lecithinase Test

  • vedligeholdelse af anaerob tilstand er obligatorisk.
  • en negativ lecithinase-test skal sammenlignes med en ikke-inokuleret kontrolplade, da lecithinase kan diffundere gennem hele agarpladen og gøre fortolkningen vanskelig.
  • perfringenstype a antitoksin er ikke specifikt for C. perfringens ; en positiv Nagler-reaktion kan også produceres af C. bifermentans , C. sordelli og C. baratti if heavy inoculum are used.

Quality Control of Lecithinase Test

Clostridium perfringens, ATCC13124: lecithinase positive

Clostridium sporogenes, ATCC11437: lecithinase negative

Skriv et svar

Din e-mailadresse vil ikke blive publiceret.