Lecitinázový Test – cíle, princip, postup a výsledky

biologická vzdělávací videa

Naposledy aktualizováno 4. února 2021 Sagar Aryal

cíl Lecitinázového testu

cílem je zjistit schopnost mikroorganismů produkovat enzym lecitinázu a identifikovat bakterie, které jsou schopné produkovat enzym lecitinázy.

princip Lecitinázového testu

Lecitinázy nebo fosfolipázy jsou enzymy uvolňované bakteriemi, které mají schopnost ničit živočišné tkáně a hrají roli v patogenitě. Lecitináza, která se také nazývá fosfolipáza C, je takový enzym, který štěpí fosfolipidový lecitin. Fosfolipidové komplexy jsou obvykle emulgační činidla vyskytující se v tkáních, séru a žloutku. Lecitin je normální složkou vaječného žloutku. Aktivita lecitinázy se používá k charakterizaci několika grampozitivních a gramnegativních bakterií. Bakteriální lecitinázy rozkládají tento lecitin na nerozpustné diglyceridy, což vede k neprůhlednému halo, obklopující kolonii, když se pěstuje na agarovém médiu vaječného žloutku.

Agar vaječného žloutku je diferenciální a obohacené médium používané při izolaci a předpokládané diferenciaci různých druhů na základě jejich produkce lecitinázy a lipázy a proteolytické aktivity. V agaru vaječného žloutku může být lipoproteinová složka Lecitovitellin také rozdělena lecitinázou na fosforylcholin a nerozpustný diglycerid, což vede k tvorbě sraženiny v médiu. Tato sraženina se vyskytuje jako bílý halo, obklopující kolonii, která produkuje enzym lecitinázy. Vytvořená opalescence je způsobena uvolňováním volného tuku.

Poznámka:

Bacillus cereus, producent aerobních spór je silný organismus pozitivní na lecitinázu, lze identifikovat pomocí agarových destiček Mannitol-vaječný žloutek-polymyxin (MYP). B. cereus je typicky mannitol-negativní, produkuje růžovo-červené kolonie v MYP agaru se zónou sraženiny kolem kolonií, což naznačuje aktivitu pozitivní na lecitinázu. Pro identifikaci Clostridium perfringens a jeho odlišení od jiných druhů klostridií se používá vaječný žloutek. Jedná se o obohacené, neselektivní a diferenciální médium a používá se také v Naglerově testu pro předpokládanou identifikaci Clostridium perfringens. Je balen v bezkyslíkovém, redukovaném stavu, aby se zabránilo tvorbě toxických oxidovaných vedlejších produktů, které poškodí povinné anaerobní látky a inhibují růst náročnějších druhů. Pozitivní lecitinázový test je charakterizován výskytem bílé, neprůhledné, difúzní zóny, která zasahuje do média obklopujícího kolonie.

média používaná v Lecitinázovém testu

vaječný žloutek agar střední

pankreatický Digest kaseinu 15,0 gm
Vitamin K 1 10, 0 gm
chlorid sodný 5,0 gm
Papaic Digest sójové moučky 5.0 gm
Kvasnicový extrakt 5.0gm
L-cystin 0,4 gm
Hemin 5,0 mg
emulze vaječného žloutku 100,0 ml
Agar 20.0 gm

konečné pH 7.0 +/- 0.3 při 25 ° C.

postup Lecitinázového testu

  1. vezměte smyčku zkušebního organismu a pruhujte ji jako přímku na talíři.
  2. inkubujte anaerobně v nádobě s plynovým pak bezprostředně po protržení a přeneste do inkubátoru udržovaného při 35-37o C po dobu 24-48 hodin pro anaerobní bakterie a pro aerobní inkubujte destičku při 35-37o C po dobu 24-48 hodin.
  3. zkontrolujte desku pro opalescentní halo obklopující inokulum.

výsledek interpretace Lecitinázového testu

výsledek interpretace Lecitinázového testu

pozitivní lecitinázový test: Vzhled bílé, neprůhledné difúzní zóny, která zasahuje do média obklopujícího kolonie.

negativní lecitinázový test: absence bílé neprůhledné zóny vyčnívající z okraje kolonie.

omezení Lecitinázového testu

  • udržování anaerobního stavu je povinné.
  • negativní test lecitinázy by měl být porovnán s neočkovanou kontrolní deskou, protože lecitináza může difundovat po celé agarové desce a ztěžovat interpretaci.
  • perfringenstyp a antitoxin není specifický pro C. perfringens; pozitivní Naglerovu reakci mohou také vyvolat C. bifermentans, C. sordelli A C. baratti if heavy inoculum are used.

Quality Control of Lecithinase Test

Clostridium perfringens, ATCC13124: lecithinase positive

Clostridium sporogenes, ATCC11437: lecithinase negative

Napsat komentář

Vaše e-mailová adresa nebude zveřejněna.